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Prime editor基因编辑细胞系服务

开创精确编辑的新纪元!

 

Prime editor(PE)作为先导编辑技术,以其不需要DNA双链断裂和HDR的特点,通过融合逆转录酶实现基因组定点区域的碱基替换、基因敲入和基因敲除,被誉为CRISPR-Cas9系统的"真正竞争者"。 PE的主要原理是将CRISPR-Cas9系统的引导切割功能与逆转录酶对模板反转录替换功能相结合,实现精确基因编辑的目的。与CRISPR-Cas9系统不同,PE基于改造的向导RNA(prime engineered guide RNA/pegRNA),其中包含单个引导RNA(sgRNA),但其3'-端还有引物结合序列(Prime binding site,PBS)和逆转录模板序列(RT template)。Prime editor蛋白Cas9切口酶(Cas9 nickase H840A)与逆转录酶(M-MLV RT)融合而成。


在Prime editor系统中,Cas9切口酶在pegRNA的sgRNA引导下,切割与PAM(NGG)同链的DNA单链,pegRNA 3'-端的PBS与切割断点前的碱基识别配对。逆转录酶(如M-MLV RT)通过PBS序列后面设计的反转录模板进行反转录,将目标序列直接聚合到切口的DNA链上。经过PAM链切割后,单链DNA会进入3'侧翼和5'侧翼的动态平衡状态,但5'侧翼会被具有5'核酸内切酶和5'核酸外切酶活性的FEN1和具有5'核酸外切酶活性的EXO1蛋白切割。因此,通过反转录酶合成的编辑序列,有更大的概率保留在后续修复的序列中。通过这一系统,在无需双链断裂和外源DNA模板的情况下,可以有效产生精确的碱基转换、插入、删除等变异。

 

1. 碱基替换:

利用Prime editor系统,我们可以精确地引入单个碱基的替换。首先,设计合适的pegRNA,其中包含目标基因的引导序列(用于定位)以及PBS和RT template序列。通过引导RNA的引导序列,Cas9切口酶(Cas9 nickase H840A)被定位到目标基因的特定位置。逆转录酶以PBS序列为模板,在切割断点前的碱基位置引入所需的替换碱基,完成精确的碱基替换。 


2. 短片段插入:

利用Prime editor系统,我们可以在目标位点插入短片段DNA。与碱基替换类似,通过设计适当的pegRNA,Cas9切口酶被定位到目标基因的特定位置。逆转录酶以PBS序列为模板,将所需的短片段DNA合成到切割的DNA链上,实现短片段的插入。 


3. 大范围基因片段删除:

Prime editor系统还可以实现较大范围的基因片段删除。通过引导RNA的引导序列,Cas9切口酶定位到目标基因的特定位置,发生切割。然后,逆转录酶以PBS序列为模板,在切割断点前合成新的DNA序列。同时,5'侧翼和3'侧翼的核酸内切酶和外切酶活性切割切口,使得新的DNA序列被优先保留。通过这种方式,可以实现大范围的基因片段删除。

 

通过Prime editor系统的精确编辑功能,我们可以实现基因组的精准操作,包括碱基替换、短片段插入和大范围基因片段删除。这为基因研究和应用提供了更多的可能性,并推动了基因组编辑领域的发展。

 

我们的服务优势:


1. 精确编辑能力:Prime editor系统具有精确编辑基因组的能力,可以实现单个碱基替换、短片段插入和大范围基因片段删除,提供高度可定制的基因编辑解决方案。

2. 无需双链断裂和外源DNA模板:与传统的CRISPR-Cas9系统相比,Prime editor系统不需要引入双链断裂和外源DNA模板,大大简化了编辑过程,降低了操作风险。

3. 提高编辑效率:Prime editor系统经过优化,具有更高的编辑效率和更低的得失位引入率,能够在细胞中实现高效而精确的基因组编辑。

4. 多样化的逆转录酶选择:根据不同需求,可以选择逆转录酶的类型,如M-MLV RT、AMV RT、CaMV RT等,以进一步调节逆转录的准确性和错误频率。

5. 高质量的服务支持:我们拥有经验丰富的科学团队和专业技术人员,能够提供个性化的咨询和技术支持,确保项目顺利进行并达到客户的要求。

 

客户评价:


客户1:吉纳星辰的Prime editor服务为我们的基因编辑研究提供了极大的便利。他们的团队专业且高效,能够准确理解我们的需求并提供最合适的解决方案。编辑结果准确可靠,我们对他们的服务非常满意。

客户2:使用吉纳星辰的Prime editor系统进行基因组编辑,我们获得了出色的结果。编辑效率高,实现了精确的基因改造。他们的服务团队非常专业,提供了全方位的支持和解答。我们强烈推荐他们的服务。

客户3:吉纳星辰的Prime editor服务在我们的研究中发挥了重要作用。他们的技术团队专业且经验丰富,能够快速响应并解决我们遇到的问题。编辑结果准确可靠,为我们的研究提供了坚实的基础。我们对他们的服务非常满意,并期待未来的合作。


这些客户评价证明了吉纳星辰Prime editor基因编辑服务的优秀品质和客户满意度。我们致力于为客户提供卓越的基因编辑解决方案,助力他们的研究取得更大的成功。


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