开创精确编辑的新纪元！
Prime editor（PE）作为先导编辑技术，以其不需要DNA双链断裂和HDR的特点，通过融合逆转录酶实现基因组定点区域的碱基替换、基因敲入和基因敲除，被誉为CRISPR-Cas9系统的"真正竞争者"。 PE的主要原理是将CRISPR-Cas9系统的引导切割功能与逆转录酶对模板反转录替换功能相结合，实现精确基因编辑的目的。与CRISPR-Cas9系统不同，PE基于改造的向导RNA（prime engineered guide RNA/pegRNA），其中包含单个引导RNA（sgRNA），但其3'-端还有引物结合序列（Prime binding site，PBS）和逆转录模板序列（RT template）。Prime editor蛋白Cas9切口酶（Cas9 nickase H840A）与逆转录酶（M-MLV RT）融合而成。
在Prime editor系统中，Cas9切口酶在pegRNA的sgRNA引导下，切割与PAM（NGG）同链的DNA单链，pegRNA 3'-端的PBS与切割断点前的碱基识别配对。逆转录酶（如M-MLV RT）通过PBS序列后面设计的反转录模板进行反转录，将目标序列直接聚合到切口的DNA链上。经过PAM链切割后，单链DNA会进入3'侧翼和5'侧翼的动态平衡状态，但5'侧翼会被具有5'核酸内切酶和5'核酸外切酶活性的FEN1和具有5'核酸外切酶活性的EXO1蛋白切割。因此，通过反转录酶合成的编辑序列，有更大的概率保留在后续修复的序列中。通过这一系统，在无需双链断裂和外源DNA模板的情况下，可以有效产生精确的碱基转换、插入、删除等变异。
1. 碱基替换：
利用Prime editor系统，我们可以精确地引入单个碱基的替换。首先，设计合适的pegRNA，其中包含目标基因的引导序列（用于定位）以及PBS和RT template序列。通过引导RNA的引导序列，Cas9切口酶（Cas9 nickase H840A）被定位到目标基因的特定位置。逆转录酶以PBS序列为模板，在切割断点前的碱基位置引入所需的替换碱基，完成精确的碱基替换。
2. 短片段插入：
利用Prime editor系统，我们可以在目标位点插入短片段DNA。与碱基替换类似，通过设计适当的pegRNA，Cas9切口酶被定位到目标基因的特定位置。逆转录酶以PBS序列为模板，将所需的短片段DNA合成到切割的DNA链上，实现短片段的插入。
3. 大范围基因片段删除：
Prime editor系统还可以实现较大范围的基因片段删除。通过引导RNA的引导序列，Cas9切口酶定位到目标基因的特定位置，发生切割。然后，逆转录酶以PBS序列为模板，在切割断点前合成新的DNA序列。同时，5'侧翼和3'侧翼的核酸内切酶和外切酶活性切割切口，使得新的DNA序列被优先保留。通过这种方式，可以实现大范围的基因片段删除。
通过Prime editor系统的精确编辑功能，我们可以实现基因组的精准操作，包括碱基替换、短片段插入和大范围基因片段删除。这为基因研究和应用提供了更多的可能性，并推动了基因组编辑领域的发展。
服务优势：
1. 精确编辑能力：Prime editor系统具有精确编辑基因组的能力，可以实现单个碱基替换、短片段插入和大范围基因片段删除，提供高度可定制的基因编辑解决方案。
2. 无需双链断裂和外源DNA模板：与传统的CRISPR-Cas9系统相比，Prime editor系统不需要引入双链断裂和外源DNA模板，大大简化了编辑过程，降低了操作风险。
3. 提高编辑效率：Prime editor系统经过优化，具有更高的编辑效率和更低的得失位引入率，能够在细胞中实现高效而精确的基因组编辑。
4. 多样化的逆转录酶选择：根据不同需求，可以选择逆转录酶的类型，如M-MLV RT、AMV RT、CaMV RT等，以进一步调节逆转录的准确性和错误频率。
5. 高质量的服务支持：我们拥有经验丰富的科学团队和专业技术人员，能够提供个性化的咨询和技术支持，确保项目顺利进行并达到客户的要求。
客户评价：
客户1：吉纳星辰的Prime editor服务为我们的基因编辑研究提供了极大的便利。他们的团队专业且高效，能够准确理解我们的需求并提供最合适的解决方案。编辑结果准确可靠，我们对他们的服务非常满意。
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